微囊藻毒素，MC，Empore，47mm固相萃取膜

前言：

微囊藻毒素（Microcystin，MC）是一類具有生物活性的，自然環(huán)境中廣泛分布的肝毒素。它對(duì)人體蛋白磷酸酶1 和蛋白磷酸酶2A 具有抑制作用，與腫瘤促進(jìn)作用有直接關(guān)系。中國(guó)生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB/T 5749-2006），將飲用水中微囊藻毒素含量限制為1.0μg/L，該標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施對(duì)水源水的質(zhì)量提出了更高的要求[1]。

實(shí)驗(yàn)中，采用1升水樣通過(guò)47mm的Empore™ C18固相萃取膜片（貨號(hào)：98-0604-0217-3）處理，并用含0.1%三氟乙酸的甲醇溶液洗脫。然后通過(guò)HPLC對(duì)提取物進(jìn)行定量[2]。

1， 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1.1 儀器與試劑 

所有試劑均為分析純或更高。

微囊藻毒素-LR標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所，20μg/mL，溶劑：甲醇）；

Empore^TM 固相萃取膜：C18，47mm，購(gòu)自美國(guó)CDS公司（貨號(hào)：98-0604-0217-3）；

甲醇（色譜純， Fisher Chemical）

三氟乙酸（分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠）

磷酸二氫鉀（分析純，北京化學(xué)試劑公司）

磷酸（分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司）

純凈水，產(chǎn)自Milli-Q® EQ 7000系統(tǒng)，美國(guó)密理博Millipore公司

磷酸二氫鉀溶液（0.05mol/L）：稱取6.8g磷酸二氫鉀，用水溶解，定容至1000.0mL

磷酸鹽緩沖液：用20%（體積分?jǐn)?shù)）磷酸溶液將磷酸二氫鉀溶液調(diào)至pH到3

0.1%三氟乙酸-甲醇溶液：用甲醇將0.1mL三氟乙酸定容至100.0mL

Sepaths UP 柱膜通用全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

高效液相色譜儀：LC600 二元高壓梯度高效液相色譜，北京萊伯泰科儀器股份有限公司。

1.2 工作液配制 

微囊藻毒素-LR工作液：將20μg/mL微囊藻毒素-LR標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用甲醇稀釋至濃度為2μg/mL；

1.3 實(shí)驗(yàn)

1.3.1 樣品制備

1L 自來(lái)水中加入100mg硫代硫酸鈉，再加入200μL的 2μg/mL 微囊藻毒素-LR標(biāo)準(zhǔn)工作液，樣品的加標(biāo)濃度為400ng/L。超聲30min，待萃取。使用同一批Empore^TM 固相萃取膜(C18，47mm)對(duì)每個(gè)樣品進(jìn)行四次重復(fù)制備。

1.3.2 凈化與濃縮

將樣品及Empore^TM 固相萃取膜（C18，47mm）加入Sepaths UP 柱膜通用全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)，并按照?qǐng)D1所示的方法進(jìn)行Sepaths UP方法編輯并進(jìn)行固相萃取富集，收集洗脫液。

對(duì)洗脫液進(jìn)行氮吹濃縮，當(dāng)收集液濃縮到近干時(shí)，加入流動(dòng)相定容到1.0mL，待HPLC檢測(cè)。

圖1 微囊藻毒素-LR SPE富集方法

1.3.3 HPLC分析

色譜柱：LabParts C18反相柱，5μm，4.6×250mm；

波長(zhǎng)：238nm；

流速：1mL/min；

柱溫：35℃；

進(jìn)樣量：20μL；

流動(dòng)相：甲醇：磷酸鹽緩沖溶液= 65：35

2, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 

圖2，微囊藻毒素-LR標(biāo)準(zhǔn)工作液色譜圖（0.4ppm）

3，結(jié)果與討論 

本次實(shí)驗(yàn)展示使用Empore^TM 固相萃取膜(C18，47mm，固相萃取柱，貨號(hào)：98-0604-0217-3)對(duì)自來(lái)水中微囊藻毒素-LR進(jìn)行富集提取的方法。實(shí)驗(yàn)中，樣品經(jīng)固相萃取凈化、濃縮等前處理步驟后，經(jīng)HPLC分析得到微囊藻毒素-LR的加標(biāo)回收率達(dá)80.1%~86.4%，結(jié)果較好。四次重復(fù)實(shí)驗(yàn)RSD=3.1%，通道間的平行性良好。實(shí)驗(yàn)表明，Empore^TM 固相萃取膜(C18，47mm，固相萃取柱，貨號(hào)：98-0604-0217-3)適用于消微囊藻毒素-LR的萃取凈化。

4，參考文獻(xiàn)

[1] GB/T 5749-2006 生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

[2]GB/T 20466-2006 水中微囊藻毒素的測(cè)定

圖 3 加標(biāo)樣品色譜圖

表1 加標(biāo)回收率結(jié)果